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    亮發光桿菌馴化育種:孢子分離法

    點擊次數:1365  更新時間:2018-07-26

        亮發光桿菌該法是采用采用成熟的擔孢子萌發培養成菌絲體而得到純菌種的方法。擔孢子具備親本的遺傳特性,但變異的機會多,生命力強,可能選育出優良的菌株。“種茹”的選擇要求與組織分離法一樣,但成熟度要求八九分成熟的金針茹子實體,因為這時的孢子萌發力強,數量多,分離之后可供挑選的機會多。孢子分離法有單孢分離與多孢分離兩種方法,馴化育種采用的是多孢子分離法,該法又分為“種茹”孢子彈射法和菌褶貼管壁法兩種。 
        (1)“種茹”孢子彈射法:取“種茹”切去菌柄,表面用70%的酒精擦洗干凈或浸入0.1%的升水中1~2min,無菌水沖洗數遍后,用濾紙吸干表面水分。在接種箱或無菌室內按無菌操作規程將“種茹”的菌褶朝下,用鐵絲支撐置于培養皿上,放在消毒擦洗過和大型鐘罩下,把滅菌過的濾紙置于培養皿容器內。整個裝置要讓之通氣,否則罩內濕度過大,孢子反而不易落下。經過12~20h,就可以看到在培養皿內或濾紙上散落一層白色的孢子印。用無菌接種環沾取少量的孢子,置于盛有無菌生理鹽水的大試管或三角燒瓶中稀釋,制成孢子懸浮液,再用無菌的注射針筒或滴管,吸取孢子懸浮液,注入1~2滴孢子液于培養基表面,并用無菌接種環涂布培養,待孢子萌發后挑取孢子萌發早、長勢好的菌落進行轉管培養。 
        (2)菌褶貼管壁法:鉤取一塊干凈、發育良好的金針茹菌褶,在無菌操作條件下,貼在斜面培養基上方的試管內壁上,為了讓之貼牢,可加1~2滴無菌水在試管壁上。放好菌褶后,塞入棉塞,置于適溫條件下培養。待看到培養基上產生與菌褶相應大小的霧狀物時,立即將附在試管壁上的菌褶片在無菌條件下取出。待長成肉眼可見的菌絲時,挑取并放入新的試管培養基中進行培養。 
        亮發光桿菌孢子分離污染率較高,要剔除肉眼可見的各種雜菌。之后,挑取的各菌株一定要經過出茹試驗來鑒定是否是優良的馴化菌株。

     Phospho-Cofilin (Ser3) 環化核苷酸調控陽離子通道蛋白亞型4

     Phospho-Cofilin/CFL1 (Tyr139) 環核苷酸陽離子通道蛋白α2抗體

     Phospho-Connexin 43 (Ser368) 還原型輔酶Ⅱ抗體

     phospho-Cortactin (Tyr466) 踝蛋白抗體

     phospho-CPI17 alpha (Thr38) 滑膜細胞凋亡抑制物1抗體

     phospho-c-Raf (Ser259) 琥珀酸脫氫酶復合體亞基A抗體

     phospho-c-Raf (Ser289) 呼吸道合胞病毒單克隆抗體

     phospho-c-Raf (Ser296) 后期促進復合蛋白3抗體

     phospho-c-Raf (Ser338) 紅細胞生成素受體抗體
    亮發光桿菌

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